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PCR實驗分區(qū)少不了掌上離心機
發(fā)布時間：
2021-04-08
概要：
掌上離心機也可以稱為迷你離心機，用于微量實驗。
常見得應用有：
1、全血中提取血清。
2、各種樣品提取上清液。
3、樣品快速沉降。
4、微量血細胞分離。
5、微生物樣品處理。
6、PCR實驗分區(qū)離心。
以最后一個實驗為例，
了解PCR實驗分區(qū)就要先了解氣溶膠，氣溶膠是由固體或液體小質點分散并懸浮在氣體介質中形成的膠體分散體系，在氣體與液體面摩擦時，操作時比較劇烈地搖動反應管，離心機離心，擴增后PCR產物開蓋時、吸樣時及移液器槍反復吹吸樣品時都可形成氣溶膠而污染。
綜上所述，為了得到好的實驗結果，PCR反應需要進行嚴格的實驗分區(qū)：
常規(guī)需要設置3個獨立的分區(qū)：試劑耗材儲存與準備區(qū)、樣品處理和樣品制備區(qū)，擴增檢測區(qū)，各區(qū)域空間完全獨立；實驗室實施空氣流向控制，擴增前和擴增后區(qū)域應具有獨立的通風系統(tǒng)，擴增后區(qū)域保持負壓狀態(tài)，其他區(qū)域保持常壓，防止擴增產物進入擴增前的區(qū)域。
PCR實驗防止污染的方法：
(一)合理分隔實驗室:將樣品的處理、配制PCR反應液、PCR循環(huán)擴增及PCR產物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進行，特別注意樣本處理及PCR產物的鑒定應 與其它步驟嚴格分開。zui好能劃分①標本處理區(qū);②PCR反應液制備區(qū);③PCR循環(huán)擴增區(qū);④PCR產物鑒定區(qū)。其實驗用品及吸樣槍應專用，實驗前應將實 驗室用紫外線消毒以破壞殘留的DNA或RNA。
(二)吸樣槍:吸樣槍污染是一個值得注意的問題。由于操作時不慎將樣品或模板核酸吸入槍內或粘上槍頭是一個嚴重的污染源，因而加樣或吸取模板核酸時要十分小心，吸樣要慢，吸樣時盡量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或產生氣溶膠污染。
(三)預混和分裝PCR試劑:所有的PCR試劑都應小量分裝，如有可能，PCR反應液應預先配制好，然后小量分裝，-20℃保存。以減少重復加樣次數(shù)，避免污染機會。另外，PCR試劑，PCR反應液應與樣品及PCR產物分開保存，不應放于同一冰盒或同一冰箱。
(四)防止操作人員污染，使用一次性手套、吸頭、小離心管應一次性使用。
(五)設立適當?shù)年栃詫φ蘸完幮詫φ?，陽性對照以能出現(xiàn)擴增條帶的zui低量的標準病原體核酸為宜，并注意交叉污染的可能性，每次反應都應有一管不加模板的試劑對照及相應不含有被擴增核酸的樣品作陰性對照。
(六)減少PCR循環(huán)次數(shù)，只要PCR產物達到檢測水平就適可而止。
(七)選擇質量好的離心機管，以避免樣本外溢及外來核酸的進入，打開離心管前應先離心，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部。開管動作要輕，以防管內液體濺出。
PCR實驗分區(qū)儀器設備主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平和掌上離心機等，加樣器、天平除了要專用外，還應有定期校準。 試劑分裝應在超凈臺中進行 擴增反應混合液應使用分子生物學級的，試劑制備好后應有質檢：一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。
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