FDA注冊號：
3010704506
它是原生質(zhì)體制備提取實(shí)驗(yàn)老搭檔
發(fā)布時間：
2021-11-24
概要：
原生質(zhì)體制備提取實(shí)驗(yàn)不能缺少老搭檔——離心機(jī),它可以說是原生質(zhì)體制備提取實(shí)驗(yàn)必備儀器了。
原生質(zhì)體制備提取作用有五點(diǎn)：
1.細(xì)胞融合。
2.原生質(zhì)體中進(jìn)行瞬時表達(dá)：亞細(xì)胞定位，蛋白和核酸相互作用。
3.利用膜片鉗技術(shù)研究離子通道及原生質(zhì)體在受光、脅迫和激素作用后的調(diào)節(jié)機(jī)制的研究。
4.細(xì)胞壁再生、細(xì)胞分裂與分化、攝入細(xì)胞器、病毒侵染機(jī)理、膜透性及離子轉(zhuǎn)運(yùn)等基礎(chǔ)理論研究的理想材料。
5.被用來作為研究植物細(xì)胞鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及其調(diào)節(jié)機(jī)制的理想材料。
由此可見原生質(zhì)體純化的重要性。下面以植物為例，進(jìn)行簡單講解:
纖維素酶和果膠酶能分解植物細(xì)胞壁，形成原生質(zhì)體；加入0．6mol/l甘露醇的目的是維持原生質(zhì)體正常的形態(tài)，防止原生質(zhì)體吸水脹破；不同植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)不同，則原生質(zhì)體結(jié)構(gòu)不同；原生質(zhì)體的結(jié)構(gòu)由細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核組成。
將酶解后的組織液過尼龍網(wǎng)膜，去除未充分消化的組織碎片，選擇與原生質(zhì)體等滲的buffer清洗原生質(zhì)體兩次，離心去除碎片（一般采取50-100 g，離心機(jī)離心1-2 min左右），最后將原生質(zhì)體重懸于適當(dāng)濃度甘露醇中。可參考以下方法來降低原生質(zhì)體懸液中的碎片占比：
1. 提前優(yōu)化樣本，比如剝?nèi)ネ馄ぃ▋H限于研究對象不包含外皮部分的樣本）、棄去質(zhì)地堅(jiān)硬的組織和損傷組織。
2. 降低離心機(jī)離心轉(zhuǎn)速和時間，去除留在上清中的碎片。
3. 如果原生質(zhì)體起始量足夠大，可考慮通過流式分選去除碎片。
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